免疫印跡試驗(yàn)（Western blot）是利用抗體與抗原間的專一性結(jié)合來偵測特定蛋白質(zhì)的表現(xiàn)，為現(xiàn)代生物化學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、免疫遺傳學(xué)中常見的實(shí)驗(yàn)方法，也被廣泛應(yīng)用于蛋白表達(dá)水平的研究、抗體活性檢測和早期疾病診斷等多個(gè)方面。

免疫印跡試驗(yàn)的技術(shù)是結(jié)合蛋白質(zhì)膠體電泳 (gel electrophoresis)的高度解析力、抗體的專一性以及酵素的敏感性，使得科學(xué)家們得以在復(fù)合物中大海撈針般的尋找蛋白質(zhì)的存在。一開始以電泳將蛋白質(zhì)進(jìn)行大小排列與分離，再利用電場將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)印到膜上，接著，擁有抗原表位的蛋白質(zhì)分子就可被抗體（一抗）特異性識(shí)別并與之結(jié)合。在此基礎(chǔ)上，酶或熒光標(biāo)記的二抗再進(jìn)一步識(shí)別并結(jié)合一抗，通過與底物反應(yīng)顯色來觀察目標(biāo)蛋白的表現(xiàn)。

Western blot若利用酵素反應(yīng)呈色，由于受質(zhì)的不同，顯色的方法可區(qū)分為：

一、化學(xué)冷光法： Chemiluminescent-based signal detection。

二、直接呈色法：Colormetirc/Chromogen-based signal detection。

三、熒光呈色法：Fluorescent substrate-based signal detection。

發(fā)表文獻(xiàn)上，又以化學(xué)冷光法為最常使用及最-方-便的呈色方法

化學(xué)冷光法(Chemiluminescent-based signal detection)的原理是利用二抗接上辣根過氧化物酶(HRP)，在H2O2存在時(shí)，HRP會(huì)氧化化學(xué)發(fā)光物質(zhì)魯米諾（lumino，氨基苯二酰一肼）而發(fā)出冷光，加上化學(xué)增強(qiáng)劑的作用，冷光強(qiáng)度可以增大1,000倍以上。化學(xué)冷光法操作簡便，只需將兩種顯色底物等體積混合，再將轉(zhuǎn)印后的膜覆蓋在上進(jìn)行呈色反應(yīng)，后續(xù)訊號(hào)偵測可藉由底片感光、顯影、定影等沖洗步驟，或是自動(dòng)化光學(xué)檢測儀器來得到實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

GeneTex 開發(fā)的Trident HRP substrate (化學(xué)發(fā)光底物)系列產(chǎn)品，原本僅供公司內(nèi)實(shí)驗(yàn)室使用，因客戶詢問度高，且經(jīng)過上萬筆實(shí)驗(yàn)測試，2016年正式將其產(chǎn)品化，提供給客戶使用。

GeneTex Trident HRP substrate系列產(chǎn)品優(yōu)勢：

1.靈敏度高：

優(yōu)于市面產(chǎn)品(見圖), 最高可檢測到飛克 (femtogram ;10-15 g)級的蛋白

2.穩(wěn)定性強(qiáng)：

A、B試劑單獨(dú)存放28℃, 避光條件下可保存12個(gè)月

3.節(jié)約時(shí)間：

不需做條件優(yōu)化, 入門新生立即可輕松上手

4.節(jié)省樣品: 

對于樣品珍貴或是表達(dá)量少的蛋白, 僅需少量蛋白即可偵測

5. 背景值低:雜訊少, 訊號(hào)強(qiáng)

圖二：化學(xué)發(fā)光底物飛克級蛋白測試

圖三：化學(xué)發(fā)光底物皮克級蛋白測試

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